Колориметриялық әдіс – зерттелетін және белгілі заттардың түс қанықтылығын салыстыруға негізделген талдау. Физикалық және химиялық сынақтардың нәтижелері ғылымның көптеген салалары үшін өте құнды, бірақ барлық зерттеулердің көпшілігі медицинада қолданылады.
Колориметриялық әдістің мәні
Заттардың химиялық құрамын анықтайтын көптеген сынақ түрлері бар. Олардың кейбіреулері әмбебап және әртүрлі салаларда кеңінен қолданылады, басқалары нақты, жоғары дәлдікпен. Колориметриялық әдіс әмбебап.
Талдау мәні белгісіз концентрациясы бар ерітіндінің түстің қанықтылығын стандартты ерітіндінің түсімен салыстыруында. Талдау кезінде зерттелетін компоненттің белгілі бір реагентпен әрекеттесуі нәтижесінде түсті қосылыс түзіледі. Реакция аяқталғаннан кейін алынған реңк концентрациясы бұрыннан белгілі ерітінділердің түсімен салыстырылады.
Колориметрияның негізін салушы Роберт Бойл деген пікір бар. Ол қысуды қолдандыерітіндідегі темірді мыстан ажырату үшін таниндер. Ерітіндідегі темірдің концентрациясы неғұрлым көп болса, соңғысының тонусы соғұрлым бай болатынын Бойль байқады.
Колориметрия
Колориметрия – ерітінділердегі заттың мөлшерін анықтау әдісі. Талдау Бугер-Ламберт-Беер заңына негізделген: жарық сәулесі заттың тығыз жұтатын қабатына түскенде оның қарқындылығы әлсірейді.
Заттың концентрациясын анықтауға арналған колориметриялық әдіс түс қарқындылығын өлшеу үшін арнайы құралдарды пайдаланып көрнекі салыстыруды немесе салыстыруды пайдалана алады. Салыстыру тікелей және өтемдік жолмен жасалады.
- Тіке. Әдіс сұйықтықтың белгілі бір тығыздығы мен температурасында зерттелетін ерітіндінің түс деңгейін эталондық ерітіндімен салыстыруды қамтиды. Фотоколориметрлер мен спектрофотометрлерді пайдаланған кезде эталондық ерітінді ретінде дистилденген су қолданылады. Құрылғылар жарықтың қарқындылығына байланысты токтың қарқындылығын өлшейді.
- Өтемдік. Әдіс зерттелетін үлгінің түсін анықтамалық түске келтіруге негізделген. Нәтижеге еріткіш қосу немесе боялған орта қабатының биіктігін арттыру арқылы қол жеткізіледі.
Спектрофотометрді, монохроматорды және басқа да дәл аспаптарды пайдалану қарапайым зерттеу әдісін одан әрі жеңілдетеді және нәтижелердің дәлдігін арттыруға мүмкіндік береді. Бұл құрылғылар жарық өткізу мөлшерін өлшеп, толқын ұзындығын анықтай алады.
Талдау қолданылатын жерде
Толориметриялық талдау әдісі нақты химиялық құрамы белгілі болған кезде, салыстыру үшін эталондық үлгі болған кезде және сынама мен эталондық үлгінің температурасы бірдей болғанда қолданылады. Боялған заттың мөлшерін тез анықтау қажет болса, бірақ ол аналитикалық әдісті қолдану мүмкін болмайтындай аз болса.
Колориметрия медицинада клиникалық биохимиялық зерттеулер және басқа салалар үшін кеңінен қолданылады:
- фармацевтика өнеркәсібі;
- тағам және алкоголь өнеркәсібі;
- агрономия (топырақ сапасын анықтау).
Артықшылықтары мен кемшіліктері
Колорометриялық әдіс, басқалар сияқты, жақсы және жағымсыз жақтары бар.
Артықшылықтары мыналарды қамтиды:
- талдау жеңілдігі, ең аз дайындық процедуралары;
- тест материалының аз мөлшерімен де тестілеу мүмкіндігі;
- Қымбат жабдықтың қажеті жоқ, дегенмен қазіргі заманғы арзан емес құрылғылар соңғы уақытта жиі қолданылуда. Бірақ олар ең дәл нәтиже береді.
Кемшіліктері: аналитикалық әдістермен салыстырғанда талдаудың төмен дәлдігі.
Белокты анықтауға арналған биурет әдісі
Қан сарысуындағы ақуыз гомеостаз жағдайын көрсететін көрсеткіш. Қандағы макромолекулярлық қосылыс концентрациясының жоғарылауы гиперпротеинемия, аз мөлшері гипопротеинемия деп аталады.
Құрамындағы ақуыздарқан сарысуының құрамы, құрылымы, қасиеттері әртүрлі, әр түрлі қызмет атқарады. Олар ферменттер, гормондар, иммуноглобулиндер және т.б. Белоктардың барлық топтары бірқатар жалпы сипаттамаларға ие, олардың негізінде биологиялық сұйықтықтардағы макромолекулярлық органикалық қосылыстарды анықтау әдістері әзірленген.
Клиникалық биохимиядағы барлық әдістердің ішінде ақуызды анықтаудың колориметриялық әдістері жиі қолданылады. Олар салыстырмалы түрде арзан, бұл бюджеттік ұйымдар үшін маңызды. және өте қарапайым. Ең көп таралғаны - биурет әдісі. Әдістің мәні: сілтілі ортадағы белоктар мыс сульфатымен әрекеттесіп, күлгін қосылыстар түзеді. Қандағы ақуыз мөлшері бояудың қанықтылығымен анықталады. Талдау үшін биоматериал таңертең аш қарынға алынады.
Талдау өте дәл, бірақ қандағы ақуыз концентрациясына әсер ететін факторлар бар:
- биоматериал сынамасына аз уақыт қалғанда физикалық белсенділік;
- жүктілік пен лактацияның соңғы апталары;
- кортикотропин, Мисклерон, клофибрат препараттарын қолдану қандағы ақуыздың құрамын арттырады, ал пиразинамид пен эстрогенді қолдану - концентрацияны төмендету үшін;
- биоматериал сынамасын алу кезінде қолдың дұрыс емес орналасуы.
Темірді анықтау
Қандағы темірдің мөлшері әртүрлі ауруларды диагностикалаудағы негізгі көрсеткіштердің бірі болып табылады. Зат гемоглобинде шоғырланған, ол оттегінің тіндерге тасымалдануын қамтамасыз етеді. Үшінтемірді колориметриялық әдіспен анықтау, көбінесе, негізгі реагент ретінде батофенантролин ерітіндісі (0,02%) қолданылады. Биоматериал - гемолиз іздері жоқ сарысу.
Әдістің мәні: темір иондары мен сульфатталған батофенантролиннің әрекеттесуі түсті комплекс түзеді, оның қанығуы фотометриялық жолмен анықталады. Нақты ерітінді алу үшін биоматериалдан сынама алу ережелерін сақтау қажет, бірақ темір-лигандтық кешендердің оптикалық тығыздықтарын дәл анықтау үшін гидроксиламин және жуғыш заттарды (натрий додецил сульфаты) пайдалана отырып, темір гемоглобиннен бөлінеді. Сынақ нәтижесі патологияның болуын және дәрежесін анықтайды. Қалыпты темір концентрациясы: болуы керек.
- 14, 2 – 26,0 мкмоль/л (ерлер);
- 10, 6- 21, 7 мкмоль/л (әйелдер).
Темір тапшылығы әдетте қан жоғалтумен, тамақты жеткіліксіз қабылдаумен немесе асқазан-ішек жолынан нашар сіңуімен байланысты.
Холестерин сынағы
Холестерин көптеген организмдердің, соның ішінде адамның жасуша қабырғасында болатын органикалық зат. Ол холекальциферол және стероидты гормондарды өндіру үшін қажет. 3,37-5,2 ммоль/л холестерин деңгейі қалыпты болып саналады. Мазмұнның жоғарылауы атеросклероздың негізгі себептерінің бірі болып табылады.
Холестеринді анықтаудың колориметриялық әдістері тамыр ауруларын ерте кезеңде тануға мүмкіндік береді. Патоанатомиялық нәтижелерге сәйкес ишемиялардың өліммен аяқталуы, науқастардағы липофильді алкоголь концентрациясы6,5-7,8 ммоль/л болды.
Колориметриялық әдістің принципі мынада: холестерин 3бета-гидрокси-стероидты оксидоредуктаза арқылы тотығады, р-аминоатипиринді түсті қосылысқа айналдыратын сутегі асқын тотығы бөлінеді. Холестериннің мазмұны оның түсінің қанықтылығымен анықталады.
Балаға тест жүргізген кезде балалық шақтағы холестерин концентрациясы 4,1 ммоль/л-ден аспауы керек екенін ескеру қажет.
Ферменттік колориметриялық әдіс дегеніміз не?
Ферменттік сынақтар белсенділігі жоғары ферменттердің реакцияларын қолдануға негізделген. Олар әртүрлі заттарды – нитрат иондарынан макромолекулаларға дейін анықтау үшін аналитикалық химияда кеңінен қолданылады.
Ферменттік (ферменттік) әдістер спецификалық болып табылады, құрамы ұқсас басқа заттардың қатысуымен белгілі бір заттарды талдауға мүмкіндік береді. Ферментті қолдануға негізделген ең көп таралған әдістер – глюкоза оксидазасы. Сынақ қандағы глюкозаның концентрациясын анықтау үшін қолданылады. Сынақтың дәлдігі оны 2 типті қант диабеті бар науқастарда гипогликемиялық агенттердің дозасын реттеу үшін пайдалануға мүмкіндік береді.
Глюкозаны тотықтырғыш әдіс глюкозаны анықтаудың ең жақсы сандық әдістерінің бірі болып саналады. Биоматериал ретінде қанды да (капиллярды) да, сарысуды да пайдалануға болады, бірақ плазма жақсырақ, өйткені оның гематокрит мөлшері төмен, бұл нәтиженің дәлдігіне теріс әсер етеді.
Негізінен фотометрияның кинетикалық әдісі қолданылады. Оның мәні мынадаглюкоза оксидаза мен пероксидазаның белгіленген арақатынасы, реакция басталғаннан кейін белгілі бір уақыт ішінде түсті қосылыстардың түзілу жылдамдығы үлгідегі глюкоза деңгейіне сәйкес болады. Сынақтың басты артықшылығы - нәтижеге үлгідегі үшінші тарап қосылыстарының болуы әсер етпейді. Әдістің кемшілігі де бар - сынақ үшін неміс немесе швед өндірушілерінің қымбат өлшеуіш құралдары қажет.
Қорытынды
Колориметриялық әдіс дәл және пайдалану оңай. Оны медицинада қолдану ағзадағы әртүрлі патологиялық өзгерістерді ерте анықтауға мүмкіндік береді. Жаңа технологияларды енгізу арқылы әдіс жетілдірілуде және барған сайын танымал бола түсуде.
